整理筆記——國家計量技術(shù)規范 08 : JJF 1752-2019 全自動(dòng)封閉型發(fā)光免疫分析儀校準規范

個(gè)人總結：校準項目（有對應技術(shù)要求）：示值誤差取低值和高值的標物，重復3次。重點(diǎn)也要注意單位：?jiǎn)挝慌c標準物質(zhì)標準值的單位一致。重復性對低值的標物，重復6次。攜帶污染率從高值到低值的順序，分別連續測量高值和低值各3次。線(xiàn)性5個(gè)濃度的標物，各測3次。如果用同一種標物，測量的順序，可以從高到低。A B C D E ，A最低，E最高E測3次，A測6次，B C D各3次。就能覆蓋全項目。標準物質(zhì)的選擇原則參照附錄A,所以這意思是說(shuō)，滿(mǎn)足附錄A的要求，不限于在5.2.1中提到的人胰島素、生長(cháng)激素或甲胎蛋白等有證標準物質(zhì).通常只能與廠(chǎng)商配套提供的試劑盒一起完成對應的校準。原理：化學(xué)發(fā)光:化學(xué)發(fā)光是指一種在化學(xué)反應中放出光的現象。這種現象是由于化學(xué)反應產(chǎn)生了激發(fā)態(tài)的化學(xué)物種，這些激發(fā)態(tài)的物種在退激發(fā)過(guò)程中釋放出能量，其中一部分能量以光的形式釋放出來(lái)，形成化學(xué)發(fā)光?；瘜W(xué)發(fā)光的原理可以用一個(gè)簡(jiǎn)單的能級圖來(lái)解釋。在能級圖中，化學(xué)物種的基態(tài)能級比激發(fā)態(tài)低，而激發(fā)態(tài)能級則高于基態(tài)。當一個(gè)激發(fā)態(tài)分子退回到基態(tài)時(shí)，其能量差就被釋放出來(lái)。這種能量釋放過(guò)程可以通過(guò)各種方式進(jìn)行，其中一種方式是通過(guò)輻射發(fā)光的形式釋放出來(lái)?；瘜W(xué)發(fā)光的反應機理可以通過(guò)許多不同的化學(xué)反應來(lái)實(shí)現。例如，一些化學(xué)反應中產(chǎn)生的氧化還原反應、放熱反應或化學(xué)分解反應等，都可能會(huì )導致發(fā)光現象。同時(shí)，也可以通過(guò)加入激發(fā)劑、熒光染料等物質(zhì)來(lái)促進(jìn)化學(xué)反應的發(fā)光效應。在全自動(dòng)封閉型免疫發(fā)光分析儀中，化學(xué)發(fā)光是用于檢測樣品中生物分子的一種方法。其基本原理是使用化學(xué)反應在樣品中產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，然后利用光學(xué)檢測器檢測并定量測量發(fā)光強度，從而確定樣品中生物分子的含量。具體來(lái)說(shuō)，全自動(dòng)封閉型免疫發(fā)光分析儀通過(guò)以下步驟實(shí)現化學(xué)發(fā)光：1. 樣品處理：將待檢測的樣品通過(guò)一系列處理步驟處理，例如提取、純化、稀釋等，以便在后續的檢測步驟中得到準確的結果。2. 反應物添加：將特定的反應物添加到樣品中。這些反應物包括標記抗體和底物，它們能夠與目標分子發(fā)生特異性結合，并在化學(xué)反應中發(fā)生作用，從而產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。3. 化學(xué)發(fā)光：反應物的作用產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光?；瘜W(xué)發(fā)光可以通過(guò)多種機制產(chǎn)生，其中最常用的是熒光素酶體系。在這種體系中，熒光素酶催化底物的氧化反應，產(chǎn)生熒光素的激發(fā)態(tài)，熒光素退激發(fā)時(shí)發(fā)出熒光，從而產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。4. 光學(xué)檢測：光學(xué)檢測器檢測化學(xué)發(fā)光的強度，從而定量測量樣品中目標分子的含量。光學(xué)檢測器可以測量熒光強度或發(fā)光強度，這取決于所使用的反應物體系?？傊?，在全自動(dòng)封閉型免疫發(fā)光分析儀中，化學(xué)發(fā)光是用于檢測樣品中生物分子的一種方法，通過(guò)添加反應物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，然后使用光學(xué)檢測器定量測量發(fā)光強度，從而確定樣品中生物分子的含量。電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光是一種利用電化學(xué)反應產(chǎn)生的化學(xué)能轉化為光能的技術(shù)。其基本原理是通過(guò)電化學(xué)反應在溶液中激發(fā)物質(zhì)的電子，將它們轉移到高能態(tài)，然后電子退激發(fā)回到低能態(tài)時(shí)釋放出光子，從而產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。其原理可以用下面的幾個(gè)步驟來(lái)解釋?zhuān)?. 電化學(xué)反應：電化學(xué)反應是電化學(xué)發(fā)光的起始步驟。它在溶液中發(fā)生，通過(guò)施加電壓或電流使化學(xué)物質(zhì)發(fā)生氧化還原反應，從而將一些電子從基態(tài)轉移到激發(fā)態(tài)。這個(gè)反應通常在電極表面發(fā)生。2. 激發(fā)態(tài)的形成：在氧化還原反應過(guò)程中，一些分子會(huì )因為失去或獲得電子而處于激發(fā)態(tài)，這些激發(fā)態(tài)的分子是化學(xué)發(fā)光的關(guān)鍵。3. 退激發(fā)：當激發(fā)態(tài)分子失去或獲得電子，電子退回到基態(tài)時(shí)，激發(fā)態(tài)分子就處于不穩定的狀態(tài)。在這種情況下，激發(fā)態(tài)分子的能量被釋放，一部分能量以光的形式釋放出來(lái)，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。4. 光子釋放：當電子退激發(fā)時(shí)，能量差可以以多種方式釋放，其中一種方式是通過(guò)輻射發(fā)光的形式釋放出來(lái)。這些釋放的光子的能量與電化學(xué)反應中的能量差有關(guān)，從而導致不同的發(fā)光強度和顏色?？傊?，電化學(xué)發(fā)光是利用電化學(xué)反應產(chǎn)生的化學(xué)能轉化為光能的一種技術(shù)。該技術(shù)可以應用于生物分析、臨床診斷、環(huán)境監測等領(lǐng)域，具有高靈敏度、高選擇性、高通量的優(yōu)點(diǎn)。全自動(dòng)封閉型免疫發(fā)光分析儀是一種常用于臨床檢驗和生物分析中的分析儀器，其測定原理基于免疫學(xué)反應和電化學(xué)發(fā)光技術(shù)。電化學(xué)發(fā)光是指利用電化學(xué)反應產(chǎn)生的化學(xué)能轉化為光能的一種技術(shù)。在全自動(dòng)封閉型免疫發(fā)光分析儀中，電化學(xué)發(fā)光是通過(guò)利用化學(xué)發(fā)光體系的電化學(xué)反應產(chǎn)生的激發(fā)態(tài)化學(xué)物質(zhì)來(lái)實(shí)現的。具體來(lái)說(shuō)，免疫發(fā)光分析儀通常使用的是雙電極電化學(xué)發(fā)光體系。該體系包含兩個(gè)電極，一個(gè)為工作電極，另一個(gè)為參比電極。在工作電極上，通過(guò)加電壓的方式促使熒光基團被氧化成為激發(fā)態(tài)，同時(shí)電子和陽(yáng)離子也被釋放。此時(shí)，參比電極的電勢保持不變，而工作電極上的電勢則逐漸升高，直至達到足夠高的電勢差，從而激發(fā)態(tài)的化學(xué)物質(zhì)釋放出光子，即產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。在免疫發(fā)光分析中，熒光標記的抗體或抗原與待測物發(fā)生特異性反應后，熒光標記的抗體或抗原被定位到工作電極上，然后進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光檢測。根據電化學(xué)發(fā)光的強度，可以推斷出待測物的濃度或者有無(wú)存在?？傊?，電化學(xué)發(fā)光是全自動(dòng)封閉型免疫發(fā)光分析儀中廣泛應用的一種技術(shù)，可以實(shí)現高靈敏度、高精度、高通量的檢測，因此在生物分析、臨床診斷等領(lǐng)域有著(zhù)廣泛的應用。免疫分析免疫分析是一種廣泛應用于醫藥、生物、食品、環(huán)境等領(lǐng)域的分析技術(shù)，其原理基于生物分子間的特異性識別和結合作用。免疫分析可分為非放射性免疫分析和放射性免疫分析兩種類(lèi)型。非放射性免疫分析的原理：1. 抗原和抗體的特異性識別和結合：抗原是生物分子中的一種，通常是一種蛋白質(zhì)或多糖體，它能夠與特定的抗體結合?？贵w是由機體免疫系統產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，它能夠特異性地識別和結合抗原。2. 抗原和抗體的結合反應：在免疫分析中，將抗原或抗體與一種固定的載體結合，形成免疫復合物。當待測物中含有與載體結合的抗原或抗體時(shí)，它們將與載體上的抗體或抗原發(fā)生特異性結合，形成免疫復合物。3. 信號檢測：將標記有特定標記物的二抗或標記物直接與免疫復合物發(fā)生反應，使標記物與免疫復合物結合，通過(guò)檢測標記物的信號來(lái)判斷樣品中的含量。放射性免疫分析的原理：與非放射性免疫分析不同，放射性免疫分析使用放射性同位素作為標記物，通過(guò)檢測放射性同位素的輻射來(lái)判斷樣品中抗原或抗體的含量。放射性免疫分析與非放射性免疫分析的原理基本相同，不同之處在于標記物的種類(lèi)。使用放射性同位素作為標記物的放射性免疫分析，通常需要更高的實(shí)驗技術(shù)要求，但其靈敏度更高，檢測范圍更廣。在全自動(dòng)封閉型免疫發(fā)光分析儀中，免疫分析的原理基本上與一般的免疫分析相同，只是使用了一些特殊的技術(shù)和裝置，實(shí)現了全自動(dòng)化、高通量、高靈敏度和高精度的檢測。該儀器使用的免疫分析原理主要包括以下步驟：1. 抗原和抗體的特異性識別和結合：樣品中的抗原或抗體與特定的標記抗體或固定在載體上的抗體相結合，形成免疫復合物。2. 分離和洗滌免疫復合物：通過(guò)磁珠分離、過(guò)濾或洗滌等方法分離和洗滌免疫復合物，去除非特異性結合物質(zhì)，提高檢測的靈敏度和特異性。3. 標記抗體的檢測：通過(guò)電化學(xué)或化學(xué)發(fā)光等技術(shù)檢測標記抗體與免疫復合物結合后所發(fā)出的信號，并根據信號的強度計算樣品中抗原或抗體的濃度。以下是正文總結內容引言歸口單位：全國生物計量技術(shù)委員會(huì )起草單位：中國計量科學(xué)研究院深圳市計量質(zhì)量檢測研究院南京市計量監督檢測院參考的相關(guān)標準：YY/T1155—2019《全自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀》首次發(fā)布1. 范圍本規范適用于化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光原理的全自動(dòng)封閉型發(fā)光免疫分析儀的校準。2. 引用文件YY/T1155—2019《全自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀》3. 概述全自動(dòng)封閉型發(fā)光免疫分析儀（以下簡(jiǎn)稱(chēng)免疫分析儀）是采用免疫分析方法檢測樣本中特定靶標的分析儀器。免疫分析儀通常由計算機系統、內部伺服系統、加樣單元、清洗單元、孵育單元及檢測單元構成。通常只能與廠(chǎng)商配套提供的試劑盒組成檢測系統完成特定靶標的分析，具有封閉型。免疫分析儀可按照設定的程序自動(dòng)完成加樣、清洗、孵育、檢測等整個(gè)分析過(guò)程，通過(guò)檢測免疫反應時(shí)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光或電化學(xué)發(fā)光信號實(shí)現特定靶標定性或定量檢測。4. 計量特性4.1 示值誤差以5.2.1中規定的標準物質(zhì)的測量結果表示，示值誤差不大于土15%，也可參照廠(chǎng)商給出的技術(shù)要求。4.2 重復性測量重復性不大于8%。4.3 攜帶污染率攜帶污染率不大于1%。4.4 線(xiàn)性線(xiàn)性相關(guān)性系數r不小于0.99。5. 校準條件5.1 環(huán)境條件5.1.1 環(huán)境溫度：(10~30)℃。5.1.2 相對濕度：≤70%。5.1.3 室內應具備良好的防塵措施，免疫分析儀應遠離振動(dòng)、電磁干擾。5.25.2.1 校準用標準物質(zhì)和試劑校準用標準物質(zhì)：人胰島素、生長(cháng)激素或甲胎蛋白等有證標準物質(zhì)，相對擴展不確定度不大于5%(k=2)。標準物質(zhì)的選擇原則參照附錄A。5.2.2 試劑：配套體外診斷試劑盒。6. 校準項目和校準方法6.1 示值誤差示值誤差的校準宜采用免疫分析儀規定檢測項目的有證標準物質(zhì)。通常情況下，檢測項目的校準點(diǎn)至少應當包括1個(gè)低值點(diǎn)和1個(gè)高值點(diǎn)。低值點(diǎn)和高值點(diǎn)至少應相差1個(gè)數量級。且低值點(diǎn)和高值點(diǎn)應當覆蓋客戶(hù)要求的校準點(diǎn)或校準區間；當客戶(hù)要求時(shí)，也可進(jìn)行單點(diǎn)校準。分別測量選定檢測項目的校準點(diǎn)，每個(gè)校準點(diǎn)分別重復測量3次，計算3次測量結果的平均值。按絕對誤差計算示值誤差。（平均值 - 標準值）。單位與標準物質(zhì)標準值的單位一致。6.2 重復性對低值點(diǎn)重復測量6次，以相對實(shí)驗標準偏差作為重復性的表征。6.3 攜帶污染率按照從高值到低值的測量順序，分別連續測量高值和低值各3次，測量值分別記為i_1i1i_1i1、i_2i2i_2i2?、i_3i3i_3i3?和j_1j1j_1j1?、j_2j2j_2j2?、j_3j3j_3j3?。以CO來(lái)表征免疫分析儀的攜帶污染率。CO = \frac{j_1-j_3}{i_3-j_3}CO=j1?j3i3?j3CO = \frac{j_1-j_3}{i_3-j_3}CO=i3??j3?j1??j3??CO攜帶污染率；j_1j1j_1j1? ——低值標準物質(zhì)第1次測量值；j_3j3j_3j3? ——低值標準物質(zhì)第3次測量值：i_1i1i_1i1?——高值標準物質(zhì)第3次測量值。6.4 線(xiàn)性在低值至高值范圍內，對至少5個(gè)濃度的標準物質(zhì)（或配制的校準溶液）進(jìn)行測量，重復測量3次，取其平均值。將測量結果的平均值與標準物質(zhì)的標準值（或校準溶液的配制值）進(jìn)行線(xiàn)性回歸。按下式計算。7. 復校時(shí)間間隔建議不超過(guò)1年。8. 附錄A 校準用標準物質(zhì)的選擇原則A.1 標準物質(zhì)的選擇人胰島素、生長(cháng)激素或甲胎蛋白有證標準物質(zhì)不可獲得或客戶(hù)要求時(shí)，可選用其他檢驗項目的有證標準物質(zhì)進(jìn)行校準。A.2 校準示值誤差的標準物質(zhì)校準示值誤差的標準物質(zhì)應具有互換性，由于免疫分析存在基質(zhì)效應，校準示值誤差時(shí)不建議將有證標準物質(zhì)稀釋使用，否則可能影響互換性。*互換性指對于給定標準物質(zhì)的規定量，由兩個(gè)給定測量程序所得測量結果之間關(guān)系與另一個(gè)指定物質(zhì)所得測量結果之間關(guān)系一致程度表示的標準物質(zhì)特性。[JJF 1001一2011，定義8.16]A.3 校準重復性、攜帶污染率和線(xiàn)性的標準物質(zhì)校準重復性、攜帶污染率和線(xiàn)性時(shí)可采用高純有證標準物質(zhì)按照重量-容量法配制校準溶液，但此時(shí)應當考慮配制過(guò)程中引入的不確定度.用于攜帶污染率校準的兩個(gè)標準物質(zhì)濃度應至少相差一個(gè)數量級.用于線(xiàn)性校準的標準物質(zhì)的最高濃度與最低濃度應至少相差一個(gè)數量級。